Questo thread nasce per concentrare tutto l’argomento di attualità in un solo posto, ricordate che lo studio di questa nuova tecnologia si trova nel thread: CRISPR/Cas9: distruggere il gene CCR5 o l’HIV DNA integrato
Ho visto che stai continuando a fare domande sulla stessa ricerca, quindi forse la risposta che ti ha dato Rospino l'altro giorno non ti ha chiarito le idee.Striblind78 ha scritto:http://sieropositivo.it/area-medica-369 ... -topi.html
qualcuno ha altre info ? grazie
Prova a leggere questo post, che è proprio relativo alla ricerca della Temple University. Se qualcosa continua a non esserti chiaro, non esitare a chiedere.
Dora ha scritto:
KAMEL KHALILI: DISTRUZIONE DEL DNA DELL'HIV-1 NELLA PRIMA FASE DELLE SPERIMENTAZIONI IN VIVO IN TOPI E RATTI
L'altro ieri Kamel Khalili e colleghi della Temple University hanno pubblicato su Gene Therapy (Nature) un articolo che segna l'inizio della sperimentazione delle CRISPR/Cas9 in vivo per distruggere l'HIV integrato nel genoma delle cellule.
- 1. Hanno lavorato su topi e ratti transgenici, i quali erano stati progettati in modo da incorporare i geni di HIV in ogni cellula del loro corpo.
2. Hanno unito una versione corta della endonucleasi Cas9 (saCas9) a molteplici RNA guida (gRNAs) costruendo il complesso saCas9/gRNA in modo da colpire le sequenze del DNA virale comprese fra il 5'-LTR e il gene Gag, così da distruggere parti del DNA di cui HIV non può fare a meno per replicarsi.
3. Hanno fatto esprimere il complesso saCas9/gRNA da un Adeno-associato virus 9 ricombinante (rAAV9), utilizzato come vettore.
4. Hanno iniettato il rAAV:saCas9/gRNA nella coda dei topi perché si diffondesse attraverso il circolo sanguigno e hanno aspettato due settimane.
5. Dopo due settimane, hanno raccolto campioni di diversi tessuti e ne hanno analizzato il DNA.
6. Hanno potuto osservare che i segmenti di HIV DNA contro cui si dovevano dirigere le CRISPR erano stati distrutti in ogni tessuto, compresi cervello, cuore, reni, fegato, polmoni, milza, linfonodi e cellule del sangue.
7. Le analisi dell'RNA virale nei ratti hanno mostrato una significativa diminuzione dell'HIV RNA nei linfociti circolanti nel sangue e nei linfonodi, a indicare che la distruzione del genoma virale aveva avuto un impatto sull'espressione dei geni di HIV nelle cellule che ospitavano il DNA provirale integrato.
Questo naturalmente fa ipotizzare a Khalili che il sistema di trasporto delle CRISPR utilizzato per la prima volta per distruggere in vivo il DNA di HIV, il rAAV, possa permettere di distruggere ampi frammenti di DNA virale e quindi diminuire di molto, o addirittura rendere nulla, la possibilità che si sviluppi del virus capace di replicazione o che si verifichino mutazioni di escape.
Il prossimo passo sarà quello di
- - sperimentare su gruppi di animali più ampi;
- monitorare per periodi più lunghi gli effetti e la sicurezza del trattamento;
- capire il dosaggio ideale di saCas9/gRNA da somministrare.
Le reazioni di due esperti che conosciamo bene - uno di modificazione genica, l'altro di latenza - non coinvolti nel lavoro di Khalili:
Keith Jerome (Vaccine and Infectious Disease Division, Fred Hutchinson Cancer Research Center, Virology Division, Department of Laboratory Medicine, University of Washington)
Warner C. Greene (Gladstone Institute of Virology and Immunology, University of California, San Francisco)
- “This is an important study that marks the next step toward using HIV DNA excision from the host genome as part of a curative strategy.
“While this is an important and elegant advance, it’s important to remember that these were transgenic animals in which the HIV sequence was artificially introduced into every cell in the body. The next step may be more difficult – showing that this approach can work against an actual infection with HIV. It will be difficult because we know HIV is expert at finding hiding places within the body.
The real issue going forward is delivery – this paper is yet another demonstration of the tremendous promise of CRISPR-Cas9, but can the AAV (Adeno Associated Virus) used in this study or other delivery methods get it to the memory T cells where latent HIV hides? And if so, can Cas9 be delivered to almost every latently infected T cell, which will be required if we are to achieve a cure?”
- “This is an interesting paper that provides data on the utility of CRISPR-Cas9 system delivered by adeno-associated virus (AAV) to cleave HIV DNA in an HIV-1 transgenic mouse (in this animal, the HIV transgene is present in every cell). They see evidence of cleavage of HIV DNA in vitro and more importantly in vivo. Perhaps not surprisingly, the effect is only partial. A concern that surrounds this approach is whether there will be any off-target effects of CRISPR-Cas9 payload; obviously deletion of an important cellular gene could be devastating. They suggest that off target effects have not been observed thus far, but this issue of safety plagues all of these types of approaches.
“Evidence of in vivo cleavage is encouraging but the real issue is whether this approach can be used to eliminate the one infectious latent provirus that is present at a frequency of 1 cell in a 1 million in infected individuals. Presumably, without being able to selectively target the latently infected cell, the AAV-CRISPR-Cas9 will infect all of the cells. We can only hope it will only act in the cell containing its target, which is a big if.
“While interesting, this is the first baby step on a long journey to the clinic. There is considerable interest in gene editing for a number of clinical applications with CRISPR-Cas9 the current darling of the field. That said, HIV latency is a tough target for the gene editing approach because we have no current method to target the therapeutic to the latently infected cell. In the final analysis, a truly effective anti-latency treatment must be safe, simple, effective, and scalable to the developing world where HIV is hitting the hardest.”
FONTI:
- - articolo: Excision of HIV-1 DNA by gene editing: a proof-of-concept in vivo study
- comunicato stampa: HIV DNA successfully excised from animals
Edit: ho modificato il titolo del thread per evitare di perpetuare i vaneggiamenti di certa stampa.
di questa tecnica s'è ampiamente parlato nel forum, purtroppo sono in giro con Tapatalk quindi non riesco a mettere il link né a unire questo thread a quello già esistente